连载：辉瑞伟哥专利无效行政纠纷案连载三

发布时间：2015-05-07来源：作者：打印字号：TT

【一审情况】
一审法院经审理查明：
1994年5月13日，辉瑞研究及发展公司向原中国专利局提出名称为“用于治疗阳痿的吡唑并嘧啶酮类”的发明专利申请，并于2001年9月19日被授权公告，专利号为94192386.X。2004年1月9日，本专利专利权人由辉瑞研究及发展公司变更为辉瑞公司。
本专利授权权利要求为：“5-\[2-乙氧基-5-（4-甲基-1-哌嗪基磺酰基）苯基\]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮或其药学上可接受的盐或含有它们中任何一种的药物组合物在制造药物中的用途，该药物用于治疗或预防包括人在内的雄性动物勃起机能障碍。”
本专利说明书载明：本发明的化合物是环状鸟嘌呤核苷3’，5’-单磷酸酯磷酸二酯酶（cGMP PDEs）的强抑制剂，与它们对环状腺嘌呤3’，5’-单磷酸酯磷酸二酯酶（cAMP PDEs）的抑制大不相同。这种选择性的酶抑制作用导致cGMP浓度的增高，从而为EP-A-0463756和EP-A-0526004中公开的所述化合物的应用提供了基础，即，治疗稳定的、不稳定的和变异的（Prinzmetal）咽峡炎，高血压，肺动脉高血压，充血性心力衰竭，动脉粥样硬化，血管开放降低的症状（例如经皮穿刺冠状动脉腔内成形术后的症状），外围血管疾病，中风，支气管炎，过敏性哮喘，慢性哮喘，过敏性鼻炎，青光眼和以肠可动性失调为特征的疾病，例如应激性肠综合征（IBS）。
出乎意料的是，现已发现所公开的这些化合物在治疗勃起机能障碍方面的作用。另外，这些化合物可以口服，从而避免了在阴茎海绵体内用药的不便。因此，本发明涉及用式（I）化合物或其药学上可接受的盐或含有它们中存在的药物组合物制造用于治疗或预防雄性动物包括人勃起机能障碍的药物，优选的一组式（I）化合物是其中的R1是H、甲基或乙基；R2是C1-C3烷基；R3是C2-C3烷基或烯丙基；R4是任选被OH、NR5R6、CN、CONR5R6或C02R7取代的C1-C2烷基，任选被NR5R6取代的乙酰基，任选被NR5R6取代的羟乙基，任选被OH或NR5R6取代的乙氧甲基、CH＝CHCN、CH＝CHCONR5R6、CH＝CHCO2R7、CONR5R6、CO2H、Br、NR5R6、NHSO2NR5R6、NHSO2R8、SO2NR9R10，或是均可任选地被甲基取代的吡啶基或咪唑基；R5和R6各自独立地为H、甲基或乙基，或者与它们所连接的氮原子一起形成一个哌啶子基、吗啉代、4-N（R11）哌嗪基或咪唑基，其中该基团可任选地被甲基或OH取代；R7是H或叔丁基；R8是甲基或CH2 CH2 CH2 NR5R6；R9和R10与它们所连接的氮原子一起形成一个哌啶子基或4-N（R12）哌嗪基，其中该基团可任选地被NR13R14或CONR13R14取代；R11是H、甲基、苄基、2-羟乙基或乙酰基；R12是H、C1-C3烷基、（羟基）C2-C3烷基、CSNR13R14或C（NH）NR13R14；R13R14各自独立地是H或甲基。
一组更优选的式（I）化合物中，R1是甲基或乙基；R2是C1-C3烷基；R3是乙基、正丙基或烯丙基；R4是CH2 NR5R6、COCH2 NR5R6、CH（OH）CH2NR5R6、CH2OCH2CH3、CH2 OCH2 CH2 OH、CH2 OCH2 CH2 NR5R6、CH＝CHCON（CH3）2、CH＝CHCO2R7、CONR5R6、CO2H、Br、NHSO2NR5R6、NHSO2 CH2 CH2 CH2 NR5R6、SO2NR9R10、2-吡啶基、1-咪唑基或1-甲基-2-咪唑基；R5和R6与它们所连接的N原子一起形成一个哌啶子基、4-羟基哌啶子基、吗啉代、4-N（R11）哌嗪基或2-甲基-1-咪唑基；R7是H或叔丁基：R9和R10与它们所连接的N原子一起形成一个4-氨基甲酰哌啶子基或4-N（R12）哌嗪基；R11是H、甲基、苄基、2-羟乙基或乙酰基；R12是H、C1-C3烷基、2-羟乙基或CSNH2。
特别优选的式（I）化合物中，R1是甲基或乙基，R2是正丙基，R3是乙基、正丙基或烯丙基，R4是COCH2NR5R6、CONR5R6、SO2NR9R10或1-甲基-2-咪唑基，R5和R6与它们所连接的N原子一起形成一个吗啉代或4-N（R11）哌嗪基，R9和R10与它们所连接的氮原子一起形成一个4-N（R12）-哌嗪基，R11是甲基或乙酰基，R12是H、甲基、2-丙基或2-羟乙基。
特别优选的个别的本发明化合物包括：
5-（2-乙氧基-5-吗啉代乙酰苯基）-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5-（5-吗啉代乙酰基-2-正丙氧苯基）-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5－\[2-乙氧基-5-（4-甲基-1-哌嗪基磺酰基）苯基］-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5－\[2-烯丙氧基-5-（4-甲基-1-哌嗪基磺酰基）苯基］-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5－{2-乙氧基-5－\[4-（2-丙基）-l-哌嗪基-磺酰基］苯基｝-l-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5-｛2-乙氧-5－\[4-（2－羟乙基）-1-哌嗪基磺酰基\]苯基｝-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5-｛5－\[4-（2－羟乙基）-1-哌嗪基磺酰基\]-2-正丙氧苯基｝-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d］嘧啶-7-酮；
5－\[2-乙氧基-5-（4-甲基-1-哌嗪基羰基）苯基\]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d\]嘧啶-7-酮；
5－\[2-乙氧基-5-（1-甲基-2-咪唑基）苯基\]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并\[4，3-d］嘧啶-7-酮。
在EP-A-0463756和EP-A-0526004中叙述了式（I）化合物及其药学上可接受的盐、它们的制备方法、测定它们的抑制cGMP PDE和cAMP PDE活性的体外试验法、它们的药物组合物及人类使用时的服药途径。
进行了预备性研究以便分离和鉴定人类阴茎海绵体的环状核苷酸PDE，海绵体的舒张导致了阴茎勃起。关于对底物的专一性、对活化剂的响应和抑制剂敏感性的研究已证实，人类阴茎海绵体含有3种明显不同的PDE酶。
由IIAM（Pennsylvania）得到新鲜的冷冻人类阴茎。将组织在室温下解冻，从阴茎上分割下阴茎海绵体，得到约2～4g组织，按下述进行分离步骤。将组织在含250mM蔗糖、1mM EDTA、0.5mM PMSF（苯甲基磺酰氟化物）和20mM HEPES（N-羟乙基哌嗪-N’-2一乙烷磺酸酯）的冰冷的等渗缓冲液（pH7.2，35ml）中粗略地切碎，混合物用一台Silversen混合器／乳化剂进行短暂的（1分钟）处理。用带有聚四氟乙烯捣锤的均化器管制备均化物，在4℃和100，000xg下离心60分钟以得到可溶的级分。将10mL高速离心后的清液加在Pharmacia Mono Q阴离子交换柱（床体积1mL）上，该柱子用含1mM EDTA、0.5mM PMSF和20mM HEPES、pH为7.2的缓冲液（色谱缓冲液）平衡。然后用5倍床体积的色谱缓冲液洗柱子，接着用连续梯度的0～500mM NaCl（总体积35mL）洗脱PDEs，收集1mL各级分。
用500nM cGMP或500nM cAMP 作为底物分析柱子各级分的PDE活性。还在1μM未标记的cGMP存在下测定cAMP PDE活性，在10mM CaC 12和10单位/mL牛脑调钙蛋白存在下确定所选级分的PDE活性。将合适的级分汇总，在研究期间于4℃贮存。
抑制作用研究一直采用浓度为5O0nM的底物进行。所有的抑制剂均溶在二甲基亚砜中，在3×10-10至1×l0-4M的范围内按半对数增量构成浓度-响应曲线。用生物统计的S形曲线拟合算法计算出IC50值。结果为：人类阴茎海绵体可溶性PDEs被分离成3个活性明显不同的级分。第一个级分I（按洗脱的次序指定）代表所存在的主要的PDE，它对作为底物的cGMP有高度的选择性。发现这一级分对于钙／调钙蛋白的激发不敏感，将其分类为PDEv。级分Ⅱ水解出cGMP和cAMP，后者的活性在cGMP存在下被激发，将其归入PDEⅡ一类，而级分Ⅲ有cAMP选择性，而且这一活性在cGMP存在下被抑制，与PDEⅢ的活性一致。
为了进一步鉴定组织中存在的PDE同功酶，用多种抑制剂进行了研究。用级分Ⅰ和Ⅱ进行的抑制剂研究采用cGMP作为底物，而级分Ⅲ研究以cAMP为底物。这些研究证实，级分Ⅰ相当于PDEv，而级分Ⅲ显然与PDEⅢ相同；级分Ⅱ（PDEⅡ）对所试验的所有抑制剂均相对地不敏感。
总之，以上研究鉴别了人类阴茎海绵体组织内的3种PDE同功酶。占支配地位的PDE是对cGMP有专一性的PDEv，而cGMP激发的cAMP PDEⅡ和cGMP抑制的cAMP PDEⅢ也存在。
本发明化合物已在体外作为试验并发现它们是对cGMP有专一性的PDEv的很强的选择性抑制剂。例如，本发明的一种特别优选的化合物对PDEv酶的IC50＝6.8nM V，但对于PDEⅡ和PDEⅢ酶只显示很弱的抑制活性，IC50分别为≥100μm和34μm。于是，阴茎海绵体组织的舒张和随之发生的阴茎勃起会由于该组织内的cGMP含量的增高而得到调节，而这又是本发明化合物对于几种PDE的抑制特点造成的。
另外，在鼠和狗内试验的本发明化合物，在最高达3mg/kg的静脉内（i.v.）和口服（p.o.）这两种情形，均未显示出任何不利的急性毒性的明显迹象。在小鼠的情形，在高达100mg/kg的剂量（i.v.）下未发生死亡。某些特别优选的化合物在以最高达10mg/kg的剂量对鼠和以高达20mg/kg的剂量对狗长期口服时，无毒性作用。
对于人，按一次剂量和多次剂量对志愿者口服试验了某些特别优选的化合物。另外，迄今为止对患者进行的研究已证实，一种特别优选的化合物诱发了阳痿男性的阴茎勃起。虽然本发明的化合物主要是设想用于治疗勃起机能障碍或男性性机能障碍，但它们也可以用来治疗女性性机能障碍，包括与阴蒂失调有关的性欲高潮机能障碍。一般来说，对于人类，口服本发明化合物是优选的途径，它最为方便，而且避免了在阴茎海绵体内用药时遇到的不便。对于代表性的男人，优选的剂量范围是每日3次5至75mg化合物。在受体患者有吞咽障碍或口服后有药物吸收损伤时，可以非肠道用药，例如经舌下或经颊用药。
针对本专利，上述第三人分别提出无效宣告请求，主要理由为本专利不符合《专利法》第25条第1款第（三）项、第33条、第26条第3款和第4款、第22条第3款以及《中华人民共和国专利法实施细则》第20条第1款。
2004年7月5日，专利复审委员会作出第6228号决定，宣告本专利全部无效。
一审法院认为：
本专利说明书是以递进的方式分别给出了第一级至第五级化合物范围，本领域技术人员可以自然地理解所谓优选级别的确定应当是与发明目的的实现密切相关的，标准应当是一致的，也就是说特别优选的个别的本发明化合物即第五级化合物的治疗效果是最佳的。本专利说明书中记载了一种特别优选的化合物的体外试验，并发现它们是对cGMP有专一性的PDEv的很强的选择性抑制剂，同时，说明书还记载了体内临床试验结果，即一种特别优选的化合物诱发了阳痿男性的阴茎勃起。尽管此级化合物有100多种，而说明书在此并未明确是哪一个具体的化合物得出了上述结果，但是应当注意的是，一般情况下，说明书中给出的具体化合物的数据或试验结果是由效果较好的化合物得出的。由此可知，较优选的第四级化合物具有体外和体内活性。第五级化合物作为说明书给出的最优选级别，其中的9个化合物结构相似，其药理学活性应当是近似的，因此，本领域技术人员确认作为这9个化合物之一的本专利权利要求化合物具有说明书所述的治疗效果是合乎情理的，而无需进一步花费创造性劳动。专利复审委员会在第6228号决定中认为治疗效果与第五级化合物以及权利要求化合物缺乏关联，从第四级化合物中筛选和确认权利要求化合物具备治疗效果需要付出创造性劳动忽视了上述情况，理由不充分，在此基础上认为本专利不符合《专利法》第26条第3款的规定是错误的，故第6228号决定应予撤销。据此，一审法院判决：一、撤销第6228号决定；二、被告专利复审委员会重新针对本专利作出无效宣告请求审查决定。
【二审情况】
联想药业公司、鸿淘茂公司、华宇制药公司、天普制药公司、白云山医药公司、海光研究所、亚邦医药公司、康尔威药业公司、吉林制药公司、合肥医工医药公司不服一审判决，向北京市高级人民法院（以下简称二审法院）提起上诉。二审法院经审理，判决：驳回上诉、维持原判。

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